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中药提取物体外抑杀犬螨虫试验

admin2020-06-16 09:28 人围观
犬螨虫感染是宠物临床上常见的一种以皮肤瘙痒、渗出性炎症及高度接触性传播为特征的顽固性体外寄生虫病。

犬螨虫通常分为蠕形螨、疥螨、痒螨3种类型,其感染犬后复发率高、较难治愈,严重影响了犬的生长发育和生活质量,同时也威胁人类的健康]。

日前,犬螨虫病的治疗主要采取化学药物治疗,由于部分药物对虫卵无效,对幼虫效果不佳,而杀虫药效只能维持10d左右,必须经过2次~3次14d~28d的治疗,才能彻底杀灭端虫。

因此,研制广谱、高效、无残毒、经济、方便,尤其是适用于宠物医院及基层兽医站使用和推广的杀虫药十分必要。

中药有较强的抗菌、抗病毒和杀灭多种寄生虫效果,近年来,应用单味中药及复方药物治疗螨病的报道日益增多,一些中药也已被相继开发为商业杀螨剂*]。
螨虫

本试验采用中药提取物与离体螨虫成虫直接接触法,比较了8种中药不同提取物对犬螨虫的体外抑杀效果,为筛选出对犬螨虫作用明显的中药活性部位,指导宠物临床合理用药,同时为研制新型杀犬螨虫制剂奠定基础。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药物苦楝皮、棒皮、蛇床子、小茴香、蒙芦、白鲜皮、羊蹄根、狼毒等,购自泰州市仁济中药饮片公司;

液体石蜡,上海国药集团产品;

10mg/ml伊维菌素注射液,吉林省康达动物药业有限公司产品, 1.1.2犬端虫样本犬蠕形螨35份,疥螨17份,耳痒螨18份,分别采集于泰爱牧宠物医院、江苏农牧科技职业学院教学动物医院临床确诊的患犬病料。

1.1.3仪器设备多功能植物粉碎机(CS]型),旋转蒸发仪型号(IKARV8),光学显微镜(奥林巴斯CX31),微量移液器(Thermo),电子天平(FA1004N)等。

1.2方法

1.2.1中药提取物的制备将上述8种中药各取100g,分别用多功能植物粉碎机打碎,然后浸泡 0.5h。

将苦楝皮、椿皮、蛇床子、小茴香4种中药及浸渍液分别装入旋转蒸发仪,然后煎汁蒸馏,收集蒸馏液,将剩余蒸馏液过滤去渣,用500mL/L乙醇沉淀48h,回收乙醇至无醇味,将蒸馏液与醇沉液合并即得4种中药的提取物。

将藜芦、白鲜皮、羊蹄根、狼毒4种中药浸渍液,分别水煎2次,过滤,2次滤液合并浓缩。

8种中药生药含量均为1g/ml.,高压灭菌后置4C冰箱备用。
曼从中药

1.2.2体外抑杀端虫试验将螨虫样本按类别随机分为1组~10组,每组7份,1组~8组为中药提取物试验组,9组为10mg/ml.伊维菌素阳性药物对照组,10组为液体石蜡空白对照组,采用直接接触法进行体外抑杀螨虫试验。

先将螨虫样本置于 24孔细胞培养板中,每孔7份,然后用微量移液器吸取8种中药提取物滴加于细胞培板中,每孔0.1

ml,对照孔分别加入10mg/ml伊维菌素和液体石蜡,每孔0.1ml。

将24孔细胞培养板置于温度为25℃~28℃,相对湿度70%~80%的培养箱中作用,每隔1h取出在高倍显微镜下观察螨虫鳌肢与足爪的运动情况,每次观察时间1min,直至所有螨虫死亡为止。

死亡判定标准l:

①虫体收缩或透明者;

②虫体破裂,外周有油滴样堆积物者;

③在高倍镜下连续观察1min,虫体或虫足不活动者。

 

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